Qualidade físico-química e atividades biológicas de caseinofosfopeptídeos obtidos por hidrólise tríptica de caseinato de sódio sob diferentes condições / Physico-chemical quality and biological activities of Casein phosphopeptides obtained by sodium caseinate tryptic hydrolysis under different conditions

Muitos métodos têm sido empregados na produção de peptídeos bioativos para a promoção da saúde. O objetivo deste estudo foi produzir caseinofosfopeptídeos por hidrólise tríptica do caseinato de sódio usando diferentes temperaturas (37 e 50 °C) e tempos de reação (2 e 4 h), caracterizá-los e analisar sua influência nas atividades citotóxica, antimicrobiana e antioxidante. Caseinofosfopeptídeos foram caracterizados através da composição centesimal, eletroforese em gel de poliacrilamida, Espectrometria de Massas e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Toxicidade para leucócitos humanos, atividade antimicrobiana utilizando o teste de microdiluição em caldo e determinação da capacidade antioxidante pelo método de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico foram os ensaios biológicos realizados. Os resultados mostraram que as quatro frações peptídicas obtidas apresentaram-se com baixo peso molecular e elevados teores proteico e mineral; quanto ao perfil aminoacídico, apresentaram elevadas e diferenciadas quantidades de ácido glutâmico e serina, que pouco variaram de acordo com o processo de obtenção; não se mostraram tóxicos para leucócitos humanos; demonstraram atividade antimicrobiana para Escherichia coli e Salmonella Enteritidis e elevada capacidade antioxidante. Os resultados físico-químicos das frações de caseinofosfopeptídeos demonstraram elevada composição nutricional em termos de proteína e, principalmente, cálcio. O conjunto de dados indicou que alterações no tempo e na temperatura de reação para a obtenção dos hidrolisados não interferem nas suas qualidades biológicas, mostrando serem seguros para a promoção da saúde e para a aplicação em situações especiais, que envolvem pacientes desnutridos, imunossuprimidos, com comprometimento ósseo ou gastrintestinal decorrentes de inflamações e infecções.

Several methods have been employed for the production of bioactive peptides for health promotion. The aim of this study was to produce and characterize Casein phosphopeptides obtained by sodium caseinate tryptic hydrolysis under different temperatures (37 and 50 °C) and reaction times (2 and 4 h), and evaluate their biological capabilities. They have been characterized by assessing their centesimal composition, by polyacrylamide gel electrophoresis, Mass Spectrometry, and High-Performance Liquid Chromatography. The biological activities tested included toxicity for human leukocytes, antimicrobial assay using the microdilution test, and determination of the antioxidant capacity by the thiobarbituric acid reactive species method. The results showed that the four fractions obtained were of low molecular weight with high protein and mineral contents; their amino acid profile showed high and differentiated amounts of glutamic acid and serine independent of the methodological procedures. The results also showed no toxicity for human peripheral leukocytes, demonstrated antimicrobial activity against Escherichia coli and Salmonella Enteritidis as well as high antioxidant capacity. The results of the physicochemical Casein phosphopeptides' fractions showed high nutritional composition in terms of protein and, particularly, calcium. The biological assays indicated that time and temperature changes in the process for obtaining casein hydrolysates have not interfered with their biological qualities. In addition, they have proven safe in promoting health in special conditions involving malnourished and/or, immunocompromised patients or those with bone and/or gastrointestinal impairment due to inflammations and infections.

Alkaloid-rich fraction of Himatanthus lancifolius contains anti-tumor agents against leukemic cells

The effects of the alkaloid-rich fraction of Himatanthus lancifolius (Müll. Arg) Woodson on normal marrow cells and leukemic cell lines were investigated. After 48 h exposure, the proliferation assay showed significant cell growth inhibition for Daudi (0.1-10 µg/mL), K-562 (1-10 µg/mL), and REH cells (10-100 µg/mL), yet was inert for normal marrow cells. A similar inhibition profile was observed in clonogenic assays. This alkaloid-rich fraction, in which uleine is the main compound, showed no signs of toxicity to any cells up to 10 µg/mL. Cell feature analyses after induction of differentiation showed maintenance of the initial phenotype. Flow cytometric expression of Annexin-V and 7-AAD in K-562 and Daudi cells has indicated that the cells were not undergoing apoptosis or necrosis, suggesting cytostatic activity for tumor cells.

Os efeitos da fração rica em alcalóides indólicos de Himatanthus lancifolius (Müll. Arg) Woodson sobre células normais de medula óssea e linhagens celulares leucêmicas foram investigados. Após 48 horas de exposição, os ensaios de proliferação demonstraram efeitos inibitórios significativos para as linhagens Daudi (0,1-10 µg/mL), K-562 (1-10 µg/mL) e REH (10-100 µg/mL), enquanto mostrou-se inerte sobre células normais de medula óssea. Os perfis de inibição se repetiram nos ensaios clonogênicos. A fração rica em alcalóides, na qual a uleína é a substância majoritária, não demonstrou toxicidade até a dose de 10 µg/mL para nenhuma das células incluídas no estudo. Da mesma forma, não se observou influência dessa fração sobre a diferenciação celular dessas linhagens, mas manutenção de seu estado maturacional inicial. O conjunto de dados descritos associado à baixa co-expressão de anexina-V e 7-AAD sugerem que esta fração exerce atividade citostática para células tumorais.

Comparison of chemical constituents of Chamomilla recutita (L) rauschert essential oil and its anti-chemotactic activity

Several essential oil samples from dried flower-heads of Chamomilla recutita (L.) Rauschert, grown and commercially available around Curitiba metropolitan area, South of Brazil, were analyzed by GC-MS and the chemical constituents were compared with an Egyptian sample obtained under similar conditions and used as a control. The local grown herbs showed levels of essential oil below the standards recommended by the Brazilian Pharmacopoeia. Also, differences in their composition as well as in the quantity of several components were found such as the unexpected inversion of the relative constitution of the A and B alpha-bisabolol oxides. Of particular interest was the striking effect of the chamomile extracts upon human leukocyte chemotaxis, a biological anti-inflammatory activity not reported before, in which cell migration was in vitro inhibited at the same level as showed by dexamethasone.

Oleos essenciais extraídos de amostras de Chamomilla recutita (l.) Rauschert cultivadas e comercializadas na região metropolitana de Curitiba, sul do Brasil, foram analisadas por cromatografia com fase gasosa acoplada à espectrometria de massa e seus constituintes químicos comparados com uma amostra egípcia, usada como controle. A quantidade de óleo essencial obtida das amostras locais foi abaixo do padrão recomendado pela Farmacopéia Brasileira IV. Observou-se, também, diferenças na composição química desses óleos, assim como na quantidade relativa dos constituintes, como os óxidos A e B do alfa-bisabolol. De particular interesse foram os efeitos inibidores dos extratos de camomila sobre a quimiotaxia de leucócitos humanos induzida por caseína, efeito biológico descrito pela primeira vez e semelhante ao promovido pela dexametasona.

Cultura de células primordiais de medula óssea tipo Dexter: um procedimento laboratorial que mimetiza a hematopoese / Dexter long-term bone marrow culture: a laboratorial procedure that mimics hemopoiesis

Várias técnicas de cultivo têm sido utilizadas na investigação de fatores que influenciam a biologia das células primordiais hemotopoéticas, tornando-se fundamentais na elucidação dos mecanismos que envolvem a hematopoiese. Este trabalho descreve o sistema de cultura idealizado por Dexter e colaboradores, no qual proliferação e diferenciação de células primitivas de medula óssea normal ocorrem quando cultivadas em meio sintético enriquecido com soros de animais e antibióticos. Células do sobrenadante removidas durante a manutença das culturas foram quantificadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores hemotopoéticos. Simultaneamente, desenvolveu-se uma camada de células aderentes, que foram também contadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores. A fração celular do sobrenadante decaiu de 1,65 x 10(elevado a potência 7) para uma média de 1,59 +- 0,42 x 10(elevado a potência 5)células mononucleares/frasco de cultura após a quinta semana de cultivocom um plantôestabelecendo-se entre esta e a décima semanas. Colônias de GM-CFC de ambas frações foram detectadas em todas as semanas ensaiadas e mostraram-se em maior número na camada aderente. Os resultados demonstram que hematopoiese pode ser mantida nas condições experimentais testadas devido ao desenvolvimento de um estroma, o qual demonstrou capacidade de sustentar uma população de células primordiais hematopoéticas em contínuas proliferação e diferenciação por 10 semanas.

Long-Term Bone Marrow Culture: a laboratorial procedure that mimics hemopoiesis

Várias técnicas de cultivo celular têm sido utilizadas na investigaçäo de fatores que influenciam a proliferaçäo e a diferenciaçäo das células tronco hemopoéticas, tornando-se fundamentais na elucidaçäo dos mecanismos que envolvem a produçäo de células sanguíneas.Este trabalho descreve um sistema de cultura onde ocorre proliferaçäo e diferenciaçäo de células hemopoiéticas primitivas de medula óssea normal. Usou-se células de medula óssea de 18 doadores que foram cultivadas, por 10 semanas, em meio sintético com antibióticos, enriquecido com soros fetal bovino e de cavalo. Após serem as culturas alimentadas semanalmente, as células do sobrenadante foram quantificadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores hemopoéticos através de ensaios clonogênicos de Unidades Formadoras de Colônias (CFU). Simulteamente, desenvolveu-se, na base do frasco de cultura, uma camada estromal contendo uma populaçäo de células aderentes, que também foram contadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores hemopoéticos. A fraçäo celular do sobrenadante decaiu de 1,65 x 107 para uma média de 1,25 x 105 células mononucleares/frasco de cultura após a sétima semana de cultivo. Um plateau pôde ser observado entre a quinta semana e o final do experimento. Colônias de GM-CFC de ambas fraçôes foram detectadas em todas as semanas ensaiadas e mostraram-se em maior número na camada aderente. Hemopoese, em especial granulomono-poese, pôde ser mantida in vitro nas condiçöes experimentais testadas e a camada estromal demonstrou capacidade de sustentar uma populaçäo de células tronco em proliferaçäo e diferenciaçäo por pelo menos 10 semanas.